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实时荧光定量PCR(后续简称为qPCR)顾名思义就是在PCR反应体系中加入荧光物质,通过荧光信号的实时接收监测PCR反应进程,由于其模板的Ct值和该模板的起始拷贝数存在线性关系,以此为依据进而达到定量的目的。简单来讲,qPCR可分为荧光染料法(以SYBR GreenⅠ***常用)与荧光探针法(TaqMan 探针)两种,而其结果分析方法也有绝对定量和相对定量之分。在此不******赘述,此次分享以SYBR GreenⅠ法为例,结果分析选用相对定量法。荧光定量PCR有着高灵敏性、高精确度、方便省时等特点,他可以在短时间内,将***个微量的特种DNA扩增到***个足以监测到的数量***。由于在体内达到***定数量***会造成生物体死亡,这就要和在动物体内的病原微生物赛跑,以达到早发现,早处理的目的。也正是由于荧光定量PCR的极高灵敏性,极其容易受到污染,所以对实验室的配置和操作人员的要求更为苛刻。在此和大***分享***些经验和教训。
注意事项
(1)分样前,所有的样品进行瞬离,可防止开盖时由于盖上粘有液体而增加污染的风险。
(2)进行样品处理时,尽量使用较长的吸头取样,防止因移液器的污染而导致样品间的交叉污染。
(3)加样时关闭生物安全柜里的照明,在冰盒上操作,尽量避免直射光源的照射下进行。
(4)条件允许,尽量使用***次性带滤芯移液枪吸头,使用非带滤芯的吸头的时候,移液器尽量不要使用***大量程移液,移液器尽量避免使用第二档,防止打出气泡,回弹污染移液器。
(5)加样后将荧光定量PCR管瞬时离心,不要在荧光定量PCR管上做任何标志,不能用手碰到PCR管盖上的采光部位,以免影响实验的准确性。
(6)荧光探针应避光保存,加入核酸模板后应尽快上机,以防探针淬灭。
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上海聚慕医疗器械有限公司成立于2015年,成立十多年以来已服务于10万+医疗用户,复购率达到31.25%
温馨提示:
1.实时荧光定量PCR仪可能含有禁忌内容或者注意事项,具体详见说明书;
2.购买实时荧光定量PCR仪后应仔细阅读实时荧光定量PCR仪说明书或者在医务人员的指导下购买和使用;
3.以上实时荧光定量PCR仪内容均来自于生产厂***、代理商网站不作为宣传购买依据如与实时荧光定量PCR仪说明书有冲突的,均以实时荧光定量PCR仪说明书为准;
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